弓形虫IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法）说明书
【产品名称】
通用名称：弓形虫IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
【包装规格】
48人份／盒、96人份／盒。
【预期用途】
定性检测人血清或血浆样本中的弓形虫IgM抗体。
用于弓形虫病的早期辅助诊断。检测不得用于无症状人群的产前筛查；不得将本试剂的检测结果单独作为终止妊娠的依据。
弓形虫病（toxoplasmosis）是由刚地弓形虫所引起的人畜共患病。这种疾病是通过感染食物来传播的，或由卵囊感染，或直接由家畜感染以及宫内感染。弓形虫感染后，特异性IgM抗体可在感染后6天左右检出，然后维持数周至数月，最后逐渐下降直至消失；弓形虫IgG抗体的出现晚于IgM抗体，感染后2～3个月才达峰值，维持时间也较长。弓形虫IgM抗体检测可用于近期弓形虫感染的诊断；弓形虫IgG抗体检测可用于弓形虫既往感染的诊断，也可用于近期感染的辅助诊断。在首次检出弓形虫IgG抗体后，2～3周后再次采样检测，如IgG抗体效价有4倍以上的增长，则提示近期感染。
【检验原理】
本品应用酶联免疫法（ELISA）间接法原理检测人血清或血浆样本中的弓形虫IgM抗体。样本中待测抗体与微孔板表面的弓形虫抗原形成抗原抗体复合物，加入抗人IgM抗体酶标记物，形成（抗原－待测抗体－抗人IgM抗体酶标记物）免疫复合物，加入显色液，在酶作用下产生颜色反应，通过酶标仪测定显色反应即可定性检测待测样品中的弓形虫IgM抗体。
【主要组成成分】
1. 本试剂盒中包含的组分：
序号 组分名称 主要成分 使用方法 装量
    96人份/盒 48人份/盒
1 预包被弓形虫抗原的微孔板 微孔板中预包被弓形虫天然抗原 可拆成单孔，直接使用 96孔 48孔
2 抗人IgM抗体酶标记物 辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人IgM抗体；硼酸盐缓冲液，含0.002%苯酚红、蛋白稳定剂。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
3 弓形虫IgM抗体阳性对照 弓形虫IgM阳性人血清或血浆；硼酸盐缓冲液，含0.02%硫柳汞、蛋白稳定剂。 直接使用 1.0mL×1支 1.0mL×1支
4 弓形虫IgM抗体阴性对照 弓形虫IgM阴性人血清或血浆；硼酸盐缓冲液，含0.02%硫柳汞、蛋白稳定剂。 直接使用 1.8mL×1支 1.8mL×1支
5 显色液A 含柠檬酸、过氧化氢 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
6 显色液B 含柠檬酸、四甲基联苯胺（TMB） 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
7 浓缩洗涤液
（10倍） 磷酸盐缓冲液，含吐温-20，10倍浓缩 用蒸馏水10倍稀释后使用 50mL×1瓶 50mL×1瓶
8 样品稀释液
（IgM） 磷酸盐缓冲液，含甘油，山羊抗人IgG抗体。 直接使用 50mL×2瓶 50mL×1瓶
9 终止液 硫酸溶液 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
10 密封袋   1个 1个
11 封板膜   1片 1片
12 记录纸   1份 1份

2. 需要但未提供的材料：
蒸馏水或去离子水
微孔板清洗器
10μL～100μL、1mL移液器与一次性吸嘴
37℃恒温设备
微孔振荡器
酶标仪
60分钟或更长时程的计时器
【储存条件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，有效期为12个月。
生产日期及失效日期见标签。
【适用仪器】
具有450nm和630nm波长的酶标仪
【样本要求】
本试验用血清或血浆进行检测，用量为10μL。按照标准方法收集血清或血浆，室温保存样品不要超过8小时，若实验在8小时以后进行，需将样品保存在2℃～8℃，如保存超过1周则保存在-20℃以下。本试验可用于含乙二胺四乙酸（EDTA）、柠檬酸钠、肝素钠、草酸钠抗凝剂样本的检测，但含其它种类抗凝剂的样本能否用于本试验尚无实验数据。
【检验方法】
1. 试验过程注意事项
1.1 试剂盒各组分从冷藏环境中取出时，应在室温（20℃～25℃）平衡至无潮气方可使用。拆封后未用完的包被板应放入密封袋内保存。
1.2 在储存及温育过程中，应避免强光直接照射。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染。
1.3 为避免试剂或样品的微生物污染及交叉污染，应使用一次性吸嘴，不要重复使用。
1.4 在取用对照品和酶标记物之前应轻轻摇动使其充分混匀，加样前，使用微孔振荡器充分混匀稀释过的样品。
1.5 严格遵守规定的温育时间和温度。如果第一孔与最后一孔加样时间间隔太长，将会导致不同的“预温育”时间，从而影响测量值的准确性及重复性。
1.6 洗涤结束时，应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打，确保所有孔内均无残留洗涤液，避免产生泡沫。如果使用自动洗板机，应注意正确操作。
2. 试验准备
2.1 试剂盒反应试剂准备
2.1.1 微孔条
将检测所需数量的微孔条固定于板架上，剩余的微孔条放入密封袋中保存。
2.1.2 洗涤液
在干净的量筒内稀释浓缩洗涤液。50mL浓缩洗涤液加入蒸馏水或去离子水至500mL，混匀。
2.1.3 其它液体组分
直接使用，使用前应轻轻摇动使其充分混匀。
2.2 样品准备
样品1:100稀释：取10μL待检样品，加入至含有1mL样品稀释液（IgM）的小试管内，充分混匀。
3. 检测过程
3.1 每次实验每板须设空白孔（若以双波长检测不设空白孔）、阳性对照各1孔，阴性对照3孔。空白孔不加样品和酶标记物，只加洗液、显色液A、B和终止液；阳性对照、阴性对照直接使用，100μL/孔。其余每孔加入稀释后样品100μL。置37℃±1℃温育30分钟。
3.2 甩净孔中液体，将洗液注满每孔（约300μL/孔）后，甩净拍干，反复3次。除空白孔外每孔加酶标记物50μL，置37℃±1℃温育30分钟。
3.3 甩净孔中液体，同上洗板3次，甩净拍干后，各孔加50μL显色液A、50μL显色液B，置37℃±1℃避光15分钟，每孔加入终止液50μL，轻微震荡微孔板以混合均匀。
3.4以空白孔调零，用酶标仪读取450nm处的A值。
4. 质量控制
以空白孔调零，450nm波长测定A值。阳性对照值A平均值≥0.25，阴性对照A平均值≤0.20，证明实验成立。
【阳性判断值】
如阴性对照＜0.07，按0.07计算；
计算S/N值，S/N值＝样品A值÷阴性对照A值平均值
S/N值≥3.0，则判为阳性。
S/N值＜2.43，判为阴性。
如2.43≤S/N值＜3.0，即A值在0.17～0.21之间为可疑结果（阴性对照＜0.07时），需复试。
【检验结果的解释】
本品可定性检测抗弓形虫IgM抗体，本实验阳性提示弓形虫急性或近期感染，结果仅供临床参考。对阳性和可疑结果建议1～2周后再次采样检测，动态观察抗体水平的变化。对复试或复测阳性结果建议做阻断试验或用其它方法确认。
【检验方法的局限性】
1.  样品或试剂被微生物污染以及试剂的交叉污染、高温失活都可能导致错误结果。
2.  不能仅依据单次的实验结果做出诊断。精确的诊断应考虑临床病史、症状及血清学实验，并且血清学实验结果对于免疫低下患者的诊断价值有限。
【产品性能指标】
1.  特异性、灵敏度
本品检测1327例不同人群样本，灵敏度为100%，特异度为99.9％。
2.  重复性
用精密性参考品测定，变异系数（CV）不高于15%（n＝10）。
【注意事项】
1.  本品仅用于体外诊断，不同批号试剂组分不得混用。
2.  严格按说明书操作，操作前必须先将试剂盒平衡至室温，操作时反应温度和时间必须严格控制。
3.  拆封后未用完的包被板应放入密封袋内保存。
4.  凡是染菌、严重溶血、黄疸或高血脂的待检血清可能引起错误结果，应重新采样复试。
5.  本实验阳性提示弓形虫急性或近期感染。临床医生应结合病史、体验等全面考虑诊断。判断临床意义应动态观察，即对阳性和可疑者要求1～2周后进行复查，观察抗体水平的变化。
6.  对检测或复测阳性结果建议做阻断试验或用其它方法确认。
7.  本试剂盒在制备过程中用作原料（阴性、阳性）的血清或血浆已经乙肝表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎病毒（HCV）抗体、梅毒螺旋体抗体和人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体检测为阴性，弓形虫抗原经超声波完全破碎灭活，无感染性，试剂盒内其它各种组分均无生物传染性。由于不能保证检测原料所有的传染性因素，因此本试剂盒应作为具有潜在的传染性材料对待，所有接触试剂盒的人员应按良好的实验室规范要求进行操作。
8.  任何临床样本都应作为具有传染性样品对待。
9.  显色液B中含TMB，在试验中会诱发其它反应；终止液含硫酸，有腐蚀性。一旦接触到这些液体，应立即用水彻底清洗。
【标识的解释】
包装标签
的标识    
标识的含义 温度限制 体外诊断医疗器械 参考使用说明 不得二次使用
【参考文献】
[1] 甘绍伯，等. 中国人兽共患病杂志，1991, 7(5):61.
[2] 于恩庶，等. 弓形虫病学，第一版. 福建科学技术出版社，159~160.
[3] 李丕平，王齐明，马以武，等. 白血病合并弓形虫病的初步探讨，苏州医学院学报，1993，13(4):282.
[4] 李绪琼，吴少之，李馥娥. 肿瘤与弓形虫感染关系探讨，中华肿瘤杂志，1991, 13(2):125.
[5] Dunn D, Wallon M, Perron F, et al. Mother to child transmission of toxoplasmosis: risk estimates for clinical counseling, [J]. Lancet, 1999, 353:1829~1835.
【基本信息】
注册人/生产企业名称：珠海经济特区海泰生物制药有限公司
住所：珠海市唐家湾镇港湾大道创新四路18号     
联系方式：电话号码：0756-3890858
传真号码：0756-3890848
售后服务单位名称：珠海经济特区海泰生物制药有限公司
联系方式：电话号码：0756-3890858
生产地址：珠海市唐家湾镇港湾大道创新四路18号     
生产许可证编号：粤食药监械生产许20040941号
【医疗器械注册证书编号/产品技术要求编号】国械注准20163402549
【说明书核准及修改日期】2016年12月29日