弓形虫抗体（IgG）检测试剂盒（酶联免疫法）说明书
【产品名称】
通用名称：弓形虫抗体（IgG）检测试剂盒（酶联免疫法）
【包装规格】
96人份／盒，48人份／盒
【预期用途】
本试剂盒用于体外定性检测人血清或血浆样品中的弓形虫IgG抗体。
本品系用弓形虫抗原包被的微孔板和抗人IgG抗体酶标记物及其他试剂配套组成，适用于弓形虫病的辅助诊断。
弓形虫病（Toxoplasmosis）又称弓形体病，是由刚地弓形虫所引起的人畜共患病。本病流行于世界各地，弓形虫是一种原虫，几乎所有的哺乳动物都有弓形虫寄生，是人类的传染源，其中，猫和猫科动物在传染此病时最为重要，因为常有大量的传染性卵囊随猫的粪便排出，污染外界环境，如人手、食具、食物或水被卵囊污染，即可经口感染；猫狗的唾液中可有弓形虫，与猫狗玩耍时，手、脸被舔也可被感染，其次是猪、牛、羊，它们的肌肉中也可有包囊，未煮食用也可经口感染，不同国家和地区感染率差异性很大，平均在25～50%左右。国外报道人群自然感染率为50～80%[1]，国内为0.1~47.3%，平均为5.17%[2,3]。
文献报道[4~6]，由于肿瘤放疗、化疗的开展，致使患者免疫功能低下，而伴发弓形虫感染，甚至造成死亡。国外某些国家已将弓形虫血清学检测作为肿瘤病人常规检查[7]。孕妇感染弓形虫后，可通过胎盘垂直传播给胎儿，损害胚胎发育，引起胎儿严重的神经系统发育畸形和智力障碍，降低人口素质，甚至引起死亡。近期国内研究表明，我国孕妇弓形虫感染较普遍，对下一代的健康带来严重威胁[8~9]。
一般情况下，弓形虫感染后首先出现抗弓形虫IgM抗体上升，可在感染后6天左右被测知，然后逐渐上升并维持数周至数月，最后逐渐下降直至消失[10]，故测定弓形虫IgM抗体适用于早期诊断，而弓形虫IgG抗体的出现晚于IgM，感染后2～3个月才达峰值，维持时间也较长，因此消失也较晚。IgG抗体阳性说明曾经感染过弓形虫，一般多为慢性感染，但也可为急性感染。在第一次检测IgG抗体后2～3周再用同样的方法进行检测，如抗体的效价有4倍以上的增长，则具有诊断价值。
【检验原理】
样品中待测抗体与微孔板表面的弓形虫抗原形成抗原抗体复合物，加入抗人IgG抗体酶标记物，形成（抗原－待测抗体－抗人IgG抗体酶标记物）免疫复合物，加入显色液，在酶作用下产生颜色反应，通过酶标仪测定显色反应即可定性检测待测样品中的弓形虫IgG抗体。
【主要组成成分】
1.本试剂盒包含的组份：
序号 组份名称 主要成分 使用方法 装量
    96人份/盒 48人份/盒
1 预包被弓形虫抗原的微孔板 微孔板中预包被弓形虫天然抗原 可拆成单孔，直接使用 96孔 48孔
2 抗人IgG抗体酶标记物 辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人IgG抗体（来源于山羊）；硼酸盐缓冲液，含防腐剂、稳定剂。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
3 弓形虫IgG抗体阳性对照 弓形虫IgG抗体阳性人血清或血浆；硼酸缓冲液，含0.02%硫柳汞、稳定剂。 直接使用 1.0mL×1支 1.0mL×1支
4 弓形虫IgG抗体阴性对照 弓形虫IgG抗体阴性人血清或血浆；硼酸缓冲液，含0.02%硫柳汞、稳定剂。 直接使用 1.0mL×1支 1.0mL×1支
5 弓形虫IgG抗体临界对照 弓形虫IgG抗体阳性人血清或血浆；硼酸缓冲液，含0.02%硫柳汞、稳定剂。 直接使用 1.8mL×1支 1.8mL×1支
6 显色液A 含柠檬酸、过氧化氢 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
7 显色液B 含柠檬酸、四甲基联苯胺（TMB）。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
8 浓缩洗涤液 磷酸盐缓冲液，含0.5%Tween-20，10倍浓缩。 用蒸馏水或去离子水10倍稀释后使用 50mL×1瓶 50mL×1瓶
9 样品稀释液
（IgG） 硼酸缓冲液。 直接使用 50mL×2瓶 50mL×1瓶
10 终止液 0.5 mol/L H2SO4溶液。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
11 密封袋   1个 1个
12 封板膜   4片 4片
13 记录纸   1份 1份
注：酶标记物、阳性对照、阴性对照、临界对照，必须使用试剂盒配备的，不能使用其它批号产品。显色液A、显色液B、终止液、浓缩洗涤液为通用试剂，可用于本公司所有ELISA试剂盒。
【储存条件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，有效期为12个月。生产日期及失效日期见标签。。
拆封后未用完的微孔板应放入密封袋内2℃～8℃保存。各组份拆封后应在一个月内用完。
【样本要求】
本试验用血清或血浆进行检测，用量为10μL。血清或血浆勿使用染菌、脂血或溶血样品。按照标准方法收集血清，室温保存样品不要超过8小时；若实验在8小时以后进行，需将样品保存在2℃～8℃；如保存超过1周则保存在-20℃以下，并尽量避免反复冻融，冻融次数不宜超过5次。本试验可用于含柠檬酸钠、EDTA-K2、草酸钠和肝素钠抗凝剂样本的检测，但含其它种类抗凝剂的样本能否用于本试验尚无实验数据。
【检验方法】
1.  试验过程注意事项
1.1 试剂盒各组份从冷藏环境中取出时，应在室温(20℃～25℃)平衡至无潮气方可使用。拆封后未用完的微孔板应放入密封袋内保存。
1.2  在储存及温育过程中，应避免强光直接照射。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染。
1.3  为避免试剂或样品的微生物污染及交叉污染，应使用一次性吸嘴，不要重复使用。
1.4  在取用对照品和酶标记物之前应轻轻摇动使其充分混匀，加样前，使用微孔振荡器充分混匀稀释过的样品。
1.5  严格遵守规定的温育时间和温度。如果第一孔与最后一孔加样时间间隔太长，将会导致不同的“预温育”时间，从而影响测量值的准确性及重复性。
1.6  洗涤结束时，应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打，确保所有孔内均无残留洗涤液，避免产生泡沫。如果使用自动洗板机，应注意正确操作。
2.  试验准备
2.1  试剂盒反应试剂准备
2.1.1  微孔条
将检测所需数量的微孔条固定于板架上，剩余的微孔条放入密封袋中保存。
2.1.2  洗涤液
在干净的量筒内稀释浓缩洗涤液。50mL浓缩洗涤液加入蒸馏水或去离子水至500mL，混匀。
2.1.3  其它液体组份
直接使用，使用前应轻轻摇动使其充分混匀。
2.2  样品准备
样品1:100稀释：取10L待检样品，加入至含有1mL样品稀释液（IgG）的小试管内，充分混匀。
3.  检测过程
3.1  每次实验每板须设空白孔（若以双波长检测不设空白孔）、阳性对照、阴性对照各1孔，临界对照3孔。空白孔不加样品和酶标记物，只加洗液、显色液A、显色液B和终止液；阳性对照、阴性对照、临界对照直接使用，100L/孔。其余每孔加入稀释后样品100L。置37℃±1℃温育30分钟。
3.2  甩净孔中液体，将洗液注满每孔（约300L /孔）后，甩净拍干，反复3次。除空白孔外每孔加酶标记物50L（1滴），置37℃±1℃温育30分钟。
3.3  甩净孔中液体，同上洗板3次，拍干后各孔加显色液A、显色液B各50L（1滴），置37℃±1℃避光15分钟，每孔加入终止液50L（1滴），轻微震荡微孔板以混合均匀。
3.4  单波长检测：以空白孔调零，用酶标仪读取450nm处的A值；双波长检测：用酶标仪读取450nm和630nm处的A值，以A450nm－A630nm计算A值。
4.  质量控制
阳性对照A值平均值≥0.50，阴性对照A值平均值≤0.10，临界对照A值平均值介于0.12～0.35，证明实验成立；否则试验结果无效，需重新试验。
5.  结果判定
样品A值≥临界对照A值平均值判为阳性
样品A值＜临界对照A值平均值判为阴性
【检验结果的解释】
本品可定性检测弓形虫IgG抗体，本实验阳性提示弓形虫既往感染，结果仅供临床参考。对阳性和可疑结果建议1～2周后再次采样检测，动态观察抗体水平变化，并结合临床综合做出判断。
【检验方法的局限性】
1.  样品或试剂被微生物污染以及试剂的交叉污染、高温失活都可能导致错误结果。
2.  不能仅依据单次的实验结果做出诊断。精确的诊断应考虑临床病史、症状及血清学实验，并且血清学实验结果对于免疫低下患者的诊断价值有限。
【产品性能指标】
1.  外观
标签应清晰，易识别。试剂盒各组份应齐全，完整，液体无渗漏。
2.  阴性参考品符合率
15份阴性企业参考品检测结果不得出现假阳性（15／15）。
3.  阳性参考品符合率
15份阳性企业参考品检测结果不得出现假阴性（15／15）。
4.  检测限
用检测限参考品进行检定，不高于1.0IU/mL。
5.  重复性
用重复性参考品重复检测10次，其变异系数（CV）不高于15％（n＝10）。
6.  稳定性
37℃放置6天，阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、检测限及重复性等检定指标达到2～5的要求。
7.  生物安全性
试剂盒中对照品要求HBsAg、HIV-Ab、HCV-Ab及梅毒螺旋体抗体检测为阴性。
8.　对国家参考品检测能力
本品检测国家参考品（230023-200901），15份阴性参考品检测结果全部为阴性；9份阳性参考品检测结果全部为阳性；精密性≤15％（n=10）；最低检出量不高于5IU/mL，均符合国家参考品标准规定。
【注意事项】
1.  本品仅用于体外诊断，不同批号试剂组份不得混用。
2.  严格按说明书操作，操作前必须先将试剂盒平衡至室温，操作时反应温度和时间必须严格控制。
3.  拆封后未用完的微孔板应放入密封袋内保存。
4.  凡是染菌、严重溶血、黄疸或高血脂的待检血清可能引起错误结果，应重新采样复试。
5.  本实验阳性提示弓形虫既往感染，临床医生应结合病史、体验等全面考虑诊断；判断临床意义应动态观察，即对阳性和可疑者要求1～2周后进行复查，观察抗体水平的变化。
6.  本试剂盒在制备过程中用作原料（阴性、阳性、临界）的血清或血浆已经HBsAg、HCV抗体、梅毒螺旋体抗体和HIV抗体检测无反应，弓形虫抗原经超声波完全破碎，无感染性，试剂盒内其它各种组分均无生物传染性。由于不能保证检测原料所有的传染性因素，因此本试剂盒应作为具有潜在的传染性材料对待，所有接触试剂盒的人员应按良好的实验室规范要求进行操作。
7.  任何临床样本都应作为具有传染性样品对待。
8.  显色液B中含TMB，在试验中会诱发其它反应；终止液含硫酸，有腐蚀性。一旦接触到这些液体，应立即用水彻底清洗。
【标识的解释】
包装标签
的标识    
标识的含义 温度限制 体外诊断医疗器械 参考使用说明 不得二次使用
【参考文献】
[1] Mao SB. Chin Med. J. 1997, 100:445.
[2] 甘绍伯, 等. 中国人兽共患病杂志, 1991, 7(5):61.
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[10] Dunn D, WaLLon M, Perron F, et aL. Mother to ChiLd transmission of toxopLasmosis: risk estimates for cLinicaL counseLLing[J]. Lancet, 1999, 353:1829~1835.
【基本信息】
注册人/生产企业名称：珠海经济特区海泰生物制药有限公司
住所：珠海市唐家湾镇港湾大道创新四路18号    
联系方式：
售后服务单位名称：
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生产地址：珠海市唐家湾镇港湾大道创新四路18号     
生产许可证编号： 
【医疗器械注册证编号/产品技术要求编号】
【说明书核准及修改日期】