东南亚缺失型α-地中海贫血Zeta链蛋白
检测试剂盒（酶联免疫法）说明书
【产品名称】
通用名称：东南亚缺失型α-地中海贫血Zeta链蛋白检测试剂盒（酶联免疫法）
【包装规格】
96人份/盒，48人份/盒。
【预期用途】
本试剂盒用于体外定性检测人血液中Zeta链蛋白。
本试剂盒适用于0.5岁以上人群的东南亚缺失型α-地中海贫血的辅助诊断。
地中海贫血（Thalassemia）是由于常染色体遗传性缺陷，引起珠蛋白链合成障碍，一种或几种珠蛋白数量不足或完全缺乏，正常血红蛋白不能形成，使红细胞易被破坏，寿命缩短的溶血性贫血。地中海贫血基因型和表现型均多样化，差异很大，根据缺失发生的基因不同，分为α与β地中海贫血。
α地中海贫血中的东南亚缺失型(--SEA)地中海贫血基因携带者在东南亚及我国南方分布最为广泛，是造成潜在危害的主要类型。因为虽然(--SEA)地贫基因携带者大部分无明显症状，但双方同为携带者的婚配子代就会有出现Bart’s水肿胎和Hb H病的可能性，给家庭和社会带来沉重负担。
已知血红蛋白Zeta链存在于正常人的胎儿期，出生后3个月即不能检出，但东南亚缺失型α-地中海贫血基因携带者的血液中终生存在Zeta链。因此，Zeta链可作为辅助诊断东南亚缺失型α-地中海贫血的标志蛋白。
【检验原理】
双抗体夹心ELISA原理：用纯化的抗Zeta链单克隆抗体包被微孔板，加入裂解的待检血液，样品中存在的Zeta链可与包被抗体形成抗原抗体复合物，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗Zeta链不同表位的单克隆抗体，形成抗体－抗原－二抗酶标记物免疫复合物。洗板，除去多余的结合物，加入显色液，产生有颜色产物，用酶标仪测定显色反应，根据显色反应的强度进行结果的定性判断。
【主要组成成分】
1. 本试剂盒包含的组份
 组份名称 主要成分 使用方法 装量
    96人份／盒 48人份／盒
1 单抗Zeta链包被板 微孔板中预包被抗Zeta链单克隆抗体（来源于小鼠） 可拆成单孔，直接使用 96孔 48孔
2 单抗Zeta链酶标记物 辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗Zeta链单克隆抗体（来源于小鼠）；硼酸盐缓冲液，含0.1% Proclin-300、0.002%苯酚红、蛋白稳定剂。 直接使用 6mL×2瓶 6mL×1瓶
3 Zeta链蛋白阳性对照 α-地中海贫血基因携带者血液，含40%甘油与0.02%硫柳汞。 取25l加入至200μL样品裂解液中，剧烈振荡60秒使红细胞完全裂解。 0.5mL×1支 0.5mL×1支
4 Zeta链蛋白阴性对照 正常人血液，含40%甘油与0.02%硫柳汞。 取25l加入至200μL样品裂解液中，剧烈振荡60秒使红细胞完全裂解。 0.5mL×1支 0.5mL×1支
5 Zeta链蛋白临界对照 重组Zeta链蛋白，40ng/mL；硼酸盐缓冲液，含40%甘油、0.2%硫柳汞、蛋白稳定剂。 直接使用 1.5mL×1支 1.5mL×1支
6 显色液A 含柠檬酸、过氧化氢 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
7 显色液B 含柠檬酸、四甲基联苯胺（TMB） 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
8 浓缩洗涤液（10倍） 磷酸盐缓冲液，含Tween-20，10倍浓缩 用蒸馏水或去离子水10倍稀释后使用 50mL×1瓶 50mL×1瓶
9 样品裂解液 含0.83%氯化铵 直接使用 30mL×1瓶 30mL×1瓶
10 终止液 0.5 mol/L H2SO4溶液 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
11 密封袋  用于密封板条 1个 1个
12 封板膜  用于密封板条 4片 4片
13 记录纸  用于试验记录 1份 1份
注：只有全部使用本公司试剂才能保证检测效果，不能混用其它制造商的产品；不同批号的组份不得混用。
2. 需要但未提供的材料：
蒸馏水或去离子水
微孔板清洗器
10μL～100μL、1mL移液器与一次性吸嘴
37℃恒温设备
微孔振荡器
60分钟或更长时程的计时器
【储存条件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，有效期为12个月。生产日期及失效日期见标签。
拆封后未用完的微孔板应放入密封袋内2℃～8℃保存。液体组份应拧紧瓶盖2℃～8℃保存。各组份拆封后应在一个月内用完。
【适用仪器】
具有450nm波长的酶标仪
【样本要求】
采用无菌抗凝静脉血。全血样本若不能立即检测，可4℃存放一周，或-20℃存放一个月，或-70℃存放3年。本试验可用于含EDTA、柠檬酸钠、肝素钠、草酸钠、双草酸盐抗凝剂样本的检测，但含其它种类抗凝剂的样本能否用于本试验尚无实验数据。染菌标本请勿使用；溶血状态对实验结果无影响；对严重贫血患者的样本应先将样本中血浆与红细胞比例调整至1:1后，再按要求进行稀释。
【检验方法】
1.  试验过程注意事项
1.1  试剂盒各组份从冷藏环境中取出时，应在室温（20℃～25℃）平衡至无潮气方可使用。拆封后未用完的微孔条应放入密封袋内保存。
1.2  在储存及温育过程中，应避免强光直接照射。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染。
1.3  为避免试剂或样品的微生物污染及交叉污染，应使用一次性吸嘴，不要重复使用。
1.4  在取用对照品和酶标记物之前应轻轻摇动使其充分混匀，加样前，使用微孔振荡器充分混匀稀释过的样品。
1.5  严格遵守规定的温育时间和温度。如果第一孔与最后一孔加样时间间隔太长，将会导致不同的“预温育”时间，从而影响测量值的准确性及重复性。
1.6  洗涤结束时，应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打，确保所有孔内均无残留洗涤液，避免产生泡沫。如果使用自动洗板机，应注意正确操作。
2.  试验准备
2.1  试剂盒反应试剂准备
2.1.1  微孔条
将检测所需数量的微孔条固定于板架上，剩余的微孔条放入密封袋中保存。
2.1.2  洗涤液
在干净的量筒内稀释浓缩洗涤液。50mL浓缩洗涤液加入蒸馏水或去离子水至500mL，混匀。
2.1.3  其它液体组份
直接使用，使用前应轻轻摇动使其充分混匀。
2.2  样品准备
取充分混匀的待检全血样品、阳性对照、阴性对照各25l分别加入至200μL样品裂解液中，在旋涡振荡器上剧烈振荡60秒使红细胞完全裂解。
3.  检测过程
3.1  每次实验每板须设空白孔（若以双波长检测不设空白孔）、阳性对照、阴性对照各1孔，临界对照3孔。空白孔不加样品和酶标记物，只加洗液、显色液A、显色液B和终止液；临界对照直接使用，100l/孔。其余每孔加入裂解后样品100l。加封板膜置37℃±1℃温育60分钟。
3.2  甩净孔中液体，将洗液注满每孔（约300μL/孔）后，每次停留60秒后甩净拍干，反复3次。除空白孔外每孔加酶标记物100l（2滴），加封板膜置37℃±1℃温育60分钟。
3.3  甩净孔中液体，同上洗板3次，拍干后各孔加显色液A、显色液B各50μL，置37℃避光15分钟，每孔加入终止液50μL，轻微震荡微孔板以混合均匀。
3.4  单波长检测：以空白孔调零，用酶标仪读取450nm处的A值；
双波长检测：用酶标仪读取450nm和630nm处的A值，以A450nm－A630nm计算A值。
4.  参考范围
阴性对照A值≤0.15；0.20≤临界对照A值平均值≤0.80，临界对照A值平均值／阴性对照A值平均值≥2.0，阳性对照A值＞临界对照A值平均值，证明实验成立。否则试验结果无效，需重新试验。
5.  结果判定
计算S/CO值，S/CO=样品A值／临界对照A值平均值。
反应性（R）：S/CO≥1.15
可疑（S）：0.85＜S/CO＜1.15
阴性（N）：S/CO≤0.85
【检验结果的解释】
结果为反应性提示为东南亚缺失型α-地中海贫血基因携带者。对可疑结果样品应复试，如复试结果仍然为可疑，则应做基因诊断确认。
【检验方法的局限性】
1.  样品或试剂被微生物污染以及试剂的交叉污染可能导致错误结果。
2.  本试剂盒不适用于0.5岁以下人群东南亚缺失型α-地中海贫血筛查，不适用于Zeta链蛋白定量检测。
3.  本品应由专业人员使用，结果仅供临床参考，临床医生应结合病史全面考虑和诊断。
【产品性能指标】
1.  灵敏度、特异性
通过1034例临床研究，与基因诊断方法比较，灵敏度为100％，特异性为100％。
2.  精密性
批内变异系数CV（%）不高于15%（n＝10）。
3.  交叉反应
未发现本品与beta地贫基因携带者的血有交叉反应。与其他类型地贫基因携带者的交叉反应尚无实验数据。
4.  干扰试验
4.1  与样品接触的抗凝剂（EDTA、柠檬酸钠、肝素钠、草酸钠、双草酸盐）对本品检测结果无显著干扰。
4.2  一定浓度范围的内源性物质（胆红素0.1~0.4 mg/mL、血红蛋白5~50 mg/mL、甘油三酯2~8 mg/mL）对本品检测结果无显著干扰。
【注意事项】
1.  本品仅用于体外诊断，一次性使用。
2.  用于制备本品阴性对照、阳性对照的血液已经HBsAg、HCV抗体、梅毒螺旋体抗体和HIV抗体检测为阴性，试剂盒内其它各种组份均无生物传染性。由于不能保证检测各组份所有的传染性因素，因此本品应作为具有潜在的传染性材料对待，所有接触试剂盒的人员应按实验室规范要求进行操作。
3.  任何临床样品都应作为具有传染性样品对待。
4.  待检样品及其他潜在感染材料试验后应予以消毒。
5.  注意避免皮肤或黏膜直接接触试剂或样品。显色液中含TMB，终止液含硫酸。含TMB的试剂在试验中会诱发其它反应；含硫酸的试剂有腐蚀性。一旦接触到这些液体，应立即用水彻底清洗。
【标识的解释】
包装标签
的标识    
标识的含义 温度限制 体外诊断医疗器械 参考使用说明 不得二次使用
【参考文献】
[1]Chui DH，Wong SC，Chung SW,Embryonic Zeta-globin chains in adults: a marker for alpha-thalassemia-1 haplotype due to a greater than 17.5-kb deletion. N Engl J Med. 1986 Jan 9;314(2):76-9
[2]Lebo RV，Saiki RK，Swanson K et al.Prenatal diagnosis of alpha-thalassemia by polymerase chain reaction and dual restriction enzyme analysis. Hum Genet. 1990
Aug;85(3):293-9.
[3]Kutlar F，Moscoso H，Kiefer CR et al. Quantities of adult，fetal and embryonic globin chains in the blood of eighteen- to twenty-week-old human fetuses. J Chromatogr. 1991 Jul 5;567(2):359-68.
【基本信息】
注册人/生产企业名称：珠海经济特区海泰生物制药有限公司
住所：珠海市唐家湾镇港湾大道创新四路18号     
联系方式：        
售后服务单位名称：
联系方式：
生产地址：珠海市唐家湾镇港湾大道创新四路18号    
生产许可证编号： 
【医疗器械注册证编号/产品技术要求编号】
【说明书核准日期及修改日期】